کروماتوگرافی لایه نازک تکنیکی است که برای جداسازی مخلوط های غیرفرار استفاده می شود. روی ورق آلومینیوم، پلاستیک یا شیشه که با لایه نازکی از مواد جاذب پوشانده شده است استفاده می شود. موادی که به طور کلی مورد استفاده قرار می گیرند اکسید آلومینیوم، سلولز یا سیلیکاژل هستند. پس از اتمام جداسازی، هر جزء به صورت لکه های عمودی جدا شده ظاهر می شود. کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) می تواند مخلوطی از اسیدهای آمینه را جدا کرده و اسیدهای آمینه آزمایشی را با اندازه گیری مقادیر RF آنها شناسایی کند. TLC یک تکنیک آزمایشگاهی پرکاربرد است و شبیه کروماتوگرافی کاغذی است. با این حال، به جای استفاده از یک فاز ثابت کاغذ، یک لایه نازک از یک جاذب مانند آلومینا، سیلیکاژل یا سلولز را شامل می شود. در مقایسه با کروماتوگرافی کاغذی، مزیت واکنش سریعتر، جداسازی بهتر را دارد.
اصل کروماتوگرافی لایه نازک
مانند سایر تکنیک های کروماتوگرافی، کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) بر اصل جداسازی متکی است. جداسازی بستگی به میل نسبی ترکیبات برای هر دو فاز دارد. در فاز متحرک، ترکیبات روی سطح فاز ساکن حرکت می کنند. حرکت به گونه ای اتفاق می افتد که ترکیبات با میل ترکیبی بالاتر برای فاز ساکن به آرامی حرکت می کنند در حالی که سایر ترکیبات سریعتر حرکت می کنند. بنابراین، جداسازی مخلوط حاصل می شود. پس از اتمام فرآیند جداسازی، اجزای جداگانه مخلوط به صورت لکه هایی در سطوح مربوطه روی صفحات ظاهر می شوند. ماهیت و ماهیت آنها با تکنیک های شناسایی مناسب مشخص می شود و در نهایت از این تکنیک برای تعیین خلوص ترکیب، پیشرفت واکنش و شناسایی ترکیبات مختلف موجود در مخلوط استفاده می شود.
فاز ساکن در کروماتوگرافی لایه نازک سیلیکا ژل، آلومینا و سلولز روی صفحات شیشه ای/فلزی، ورق های پلاستیکی و غیره است.
فاز متحرک در کروماتوگرافی لایه نازک در حال توسعه حلال / مخلوط حلال ها است.
روش کروماتوگرافی لایه نازک
صفحات کروماتوگرافی لایه نازک – صفحات آماده استفاده می شود که از نظر شیمیایی بی اثر و پایدار هستند. فاز ثابت (سیلیکاژل، آلومینا و سلولز) به صورت یک لایه نازک بر روی سطح آن اعمال می شود. فاز ثابت روی صفحه دارای اندازه ذرات ریز و همچنین ضخامت یکنواخت است.
محفظه کروماتوگرافی لایه نازک – محفظه ای که برای توسعه صفحه استفاده می شود. این به یک محیط پایدار در داخل نسبت داده می شود که به رشد لکه ها کمک می کند. همچنین از تبخیر حلال جلوگیری می کند و کل فرآیند را بدون گرد و غبار نگه می دارد.
فاز متحرک کروماتوگرافی لایه نازک – فاز متحرک فازی است که حرکت می کند و حاوی مخلوط حلال یا حلال است. این مرحله باید بدون ذرات باشد. هر چه کیفیت خلوص بالاتر باشد، لکه ها بهتر ایجاد می شوند.
کروماتوگرافی لایه نازک کاغذ فیلتر – باید در داخل محفظه نگهداری شود. در فاز متحرک مرطوب می شود.
نمودار کروماتوگرافی لایه نازک
نمودار کروماتوگرافی لایه نازک در شکل نشان داده شده است.
آزمایش کروماتوگرافی لایه نازک
در قسمت پایین بشقاب به کمک مداد علائم نازکی ایجاد می شود تا نقطه نمونه مشخص شود. یک نقطه کوچک از محلول حاوی نمونه روی صفحه اعمال می شود، صفحه TLC در محفظه ای قرار می گیرد که نقاط نمونه با سطح حلال در محفظه تماس نداشته باشد و درب آن بسته می شود. حلال با عمل مویرگی صفحه به سمت بالا حرکت می کند، با مخلوط نمونه برخورد می کند و آن را به صفحه می برد. قبل از اینکه قسمت جلوی حلال به بالای فاز ثابت برسد، صفحه باید از محفظه خارج شود و سپس صفحه خشک شود. لکه نمونه را می توان از طریق محفظه ماوراء بنفش تشخیص داد، سپس با توجه به فاکتور حفظ رنگ قابل مشاهده، RF را می توان محاسبه کرد. نمونه های رنگی و بدون نمونه رنگی با این روش قابل تشخیص هستند.
تجسم اشعه ماوراء بنفش، درمان اسیدی، تصفیه بخار ید، رنگ آمیزی والین و درمان نین هیدرین.
تجسم اشعه ماوراء بنفش در این روش نشان داد که ترکیباتی به صورت فلورسنت در معرض اشعه ماوراء بنفش تولید می شوند، به عنوان مثال پلی فنول ها.
- در عملیات اسیدی، صفحه را با غوطه ور کردن در اسید جدا می کنند، سپس با هوا خشک می کنند و سپس حرارت می دهند تا لکه های قهوه ای روی صفحه ایجاد شود.
- تیمار بخار ید، مؤلفه‌ای را که پیوند ترکیبی دو کربنی در آن وجود دارد، درمان می‌کند.
- لکه والین مانند الکل ها، آلدئیدها و کتون ها رفتار می کند.
- تیمار نین هیدرین، این تیمار در صورتی استفاده می شود که نمونه ها حاوی اسیدهای آمینه باشند.
استفاده از کروماتوگرافی لایه نازک
آزمایش کیفی داروهای مختلف مانند آرام بخش ها، بی حس کننده های موضعی، آرام بخش های ضد تشنج، مسکن ها، آنتی هیستامین ها، استروئیدها، خواب آورها توسط TLC انجام می شود.
TLC در تجزیه و تحلیل بیوشیمیایی مانند جداسازی متابولیت های بیوشیمیایی آن از پلاسمای خون، ادرار، مایعات بدن، سرم و غیره بسیار مفید است.
کروماتوگرافی لایه نازک می تواند برای شناسایی محصولات طبیعی مانند اسانس ها یا روغن های فرار، روغن های پایدار، گلیکوزیدها، موم ها، آلکالوئیدها و غیره استفاده شود.
- این به طور گسترده ای در جداسازی فرمولاسیون های دارویی چند جزئی استفاده می شود.
- برای خالص سازی نمونه ها استفاده می شود و مقایسه مستقیم بین نمونه ها و نمونه های معتبر انجام می شود.
- در صنایع غذایی برای جداسازی و شناسایی رنگ ها، شیرین کننده ها و نگهدارنده ها استفاده می شود.
- در صنایع آرایشی و بهداشتی استفاده می شود.
مزیت کروماتوگرافی لایه نازک
- مکان های مختلف TLC بدون هیچ مشکلی قابل مشاهده است.
- این فرآیند کروماتوگرافی در مقایسه با روش های دیگر مقرون به صرفه است.
- می توان از آن برای بسیاری از ترکیبات استفاده کرد و زمان زیادی نمی برد.
- این فرآیند در مقایسه با روش های دیگر بسیار ساده است.
- TLC تجزیه و تحلیل پارامترهای خلوص هر ترکیب را آسان می کند.
- بسیاری از ترکیبات را می توان به راحتی از طریق TLC جدا کرد.
معایب کروماتوگرافی لایه نازک
- فاز ثابت برای مدت طولانی در صفحات کروماتوگرافی لایه نازک رخ نمی دهد.
- طول جداسازی در مقایسه با سایر تکنیک های کروماتوگرافی محدود است.
- بازتولید نتایج حاصل از TLC دشوار است.
- از آنجایی که TLC به عنوان یک سیستم باز عمل می کند، عوامل خاصی مانند رطوبت و دما می توانند بر نتیجه نهایی کروماتوگرام تأثیر بگذارند.
- حد تشخیص زیاد است و بنابراین اگر بخواهید حد تشخیص پایین داشته باشید نمی توانید از TLC استفاده کنید.
- این فقط یک تکنیک تحلیل کیفی است و نه کمی.
